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PART 01
RSV病毒概述
呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）是一種RNA病毒，是急性下呼吸道感染的主要原因。感染好發(fā)在秋冬季節(jié)。尤其是免疫功能低下的兒童和老年人容易受到嚴(yán)重感染，也是嬰幼兒住院的主要原因之一。特別在5歲以下的嬰幼兒中，感染率更高，嚴(yán)重威脅兒童健康。
PART 02
RSV感染藥物臨床實(shí)驗(yàn)法規(guī)要求
2023年4月，CDE發(fā)布的《呼吸道合胞病毒感染藥物臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》中指出， “對(duì)于預(yù)防試驗(yàn)，所有發(fā)生有癥狀 RSV 感染 （即預(yù)防失敗的患者都應(yīng)接受中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的病毒學(xué)評(píng)估，以確認(rèn) RSV感染。” 同時(shí)指出“由于可能合并感染，還應(yīng)進(jìn)行多種呼吸道病毒的診斷的檢測(cè)試驗(yàn)?！?/span>
在耐藥性分析的部分，指導(dǎo)原則指出“應(yīng)對(duì)來(lái)自治療失敗患者的基線(xiàn)和失敗后分離物進(jìn)行基因型表征和比較，以確定是否存在耐藥病毒，如果存在，則耐藥病毒是否存在于基線(xiàn)或患者體內(nèi)。如果 RSV 分離株的基因型分析確定出現(xiàn)了一種表達(dá)新突變的病毒，則應(yīng)對(duì)其進(jìn)行表型表征。”
因此，對(duì)于RSV以及其他常見(jiàn)呼吸道病原體進(jìn)行分型，溯源進(jìn)化和耐藥分析是RSV藥物臨床試驗(yàn)中重要的組成部分。
PART 03
RSV病毒檢測(cè)方法介紹
RSV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法包括：
由賽諾菲和阿斯利康共同研發(fā)的預(yù)防嬰兒RSV感染的單克隆抗體Beyfortus (nirsevimab)，臨床試驗(yàn)中使用RT-PCR，一代測(cè)序和二代測(cè)序進(jìn)行了分型鑒定和耐藥分析。熙寧|精翰生物擁有完成性能驗(yàn)證的基于PCR和NGS的RSV檢測(cè)自主方法學(xué)，供申辦方臨床試驗(yàn)使用。
基于RT-qPCR分型及定量分析
參考《人呼吸道合胞病毒感染診斷，CT/CPMA 028-2023》中的附錄A（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法A2：核酸檢測(cè)，進(jìn)行方法開(kāi)發(fā)。對(duì)于提取的核酸樣品進(jìn)行雙通道熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)HRSV核酸（N基因）。
標(biāo)準(zhǔn)品為：人呼吸道合胞病毒A型核糖核酸液體室內(nèi)質(zhì)控品和人呼吸道合胞病毒B型核糖核酸液體室內(nèi)質(zhì)控品。
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交叉驗(yàn)證：RSV A或B型引物探針?lè)謩e與RSV B或A型病毒反應(yīng)，均無(wú)交叉反應(yīng)，且陰性對(duì)照均未檢出。
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檢測(cè)靈敏度：RSV A ~21 copies/mL；RSV B~71 copies/mL
表1 交叉驗(yàn)證結(jié)果
表2 靈敏度結(jié)果
注：RSV A定量分析
標(biāo)曲-斜率:-3.489 Y軸截距:40.588 R2:0.995 擴(kuò)增效率:93.485
注：RSV B定量分析
標(biāo)曲-斜率:-3.396 Y軸截距:42.731 R2:0.998 擴(kuò)增效率:96.991
基于二代測(cè)序的RSV及呼吸道病原體檢測(cè)
本檢測(cè)對(duì)包括呼吸道合胞病毒在內(nèi)的14種呼吸道病原體（呼吸道合胞病毒、新型冠狀病毒、流感病毒、普通冠狀病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、偏肺病毒、博卡病毒、柯薩奇病毒、腸道病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、肺炎鏈球菌）基因組全長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)序。
表3 14種呼吸道病原體信息匯總
病原體測(cè)序應(yīng)用場(chǎng)景：
· 呼吸道病原體感染定性檢測(cè)；
· 呼吸道病原體分型，溯源，進(jìn)化分析；
· 耐藥呼吸道病原體變異位點(diǎn)分析；
· 標(biāo)準(zhǔn)病原體菌株污染檢測(cè)。
RSV測(cè)序結(jié)果報(bào)告展示：
圖1 病原體種類(lèi)及占比
注:
1. 由于探針存在非特異性捕獲,可能包含部分宿主序列或無(wú)法鑒定的序列來(lái)源?？傮w比例<100%；
2. 僅對(duì)占比超過(guò)5%的病原體基因組重組裝及后讀分析。
圖2 呼吸道合胞病毒菌株分型及質(zhì)控信息
圖3 親緣關(guān)系進(jìn)化樹(shù)
PART 04
熙寧生物|精翰生物RSV檢測(cè)服務(wù)優(yōu)勢(shì)
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完善的檢測(cè)平臺(tái)，一站式檢測(cè)服務(wù)能力；
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豐富的中和抗體、結(jié)合抗體、病毒載量等檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)；
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高通量的中和抗體評(píng)估方法，基于ELISA、Fluorescence、Luminescence；
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豐富的細(xì)胞免疫研究經(jīng)驗(yàn)，ELISpot (IFN-γ, IL-4)，ICS (CD3, CD4, CD8, IFN-γ, IL-2, TNF-α, CD40L)；
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豐富的基因檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，包括呼吸道病原體測(cè)序和RSV分型的定量RT-qPCR檢測(cè)；
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全血穩(wěn)定劑，將全血分離PBMC時(shí)長(zhǎng)延長(zhǎng)到48小時(shí)，解決疫苗臨床運(yùn)營(yíng)痛點(diǎn)；
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自有P2與合作P3實(shí)驗(yàn)室；
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豐富的自主方法學(xué)；
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豐富的疾病模型經(jīng)驗(yàn)，完善的檢測(cè)服務(wù)平臺(tái)：動(dòng)物房、流式、生化、細(xì)胞、病理等。
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支持中美、中澳，多中心，大樣本量的臨床試驗(yàn)；
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豐富的海外樣品進(jìn)口經(jīng)驗(yàn)。
