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前言
隨著國務(wù)院辦公廳42號文發(fā)布，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心于2021年底正式發(fā)布《以臨床價值為導(dǎo)向的抗腫瘤藥物臨床研發(fā)指導(dǎo)原則》，臨床試驗設(shè)計將從界限分明的一期劑量爬坡看安全性，二期評估臨床有效性，三期擴大的有效性試驗的模式發(fā)生較大的整體轉(zhuǎn)變。早期臨床試驗靈活的設(shè)計模式以期有效地加快抗腫瘤藥物的臨床開發(fā)，達到及早滿足腫瘤患者對有效治療需求的目的。隨著政策落地，早期臨床試驗特別是一期臨床試驗對于藥效學(xué)分析檢測的需求將不斷的提升，在一期驗證安全性的同時進行藥效學(xué)分析是臨床快速向二期推進的關(guān)鍵指標(biāo)。早期臨床的藥效學(xué)評估檢測方法相對體外或者臨床前的檢測方法難度非常大，受到樣品的基質(zhì)復(fù)雜性，樣品穩(wěn)定性，個體差異等多方面因素的影響。本文Claudin18.2靶點抗體藥物為例，簡述下適用于臨床階段藥效學(xué)評估，基于人免疫細胞的ADCC功能分析方法。
Claudin18.2藥物研發(fā)進展
2016年ASCO年會上由Ganymed公司第一次公布了IMAB362（Zolbetuximab）的臨床數(shù)據(jù)。IMAB362在Claudin18.2陽性的晚期胃癌及胃食管交界處癌驚艷的臨床數(shù)據(jù)，讓Claudin18.2靶點一躍成為國內(nèi)快速跟進的熱門靶點。至今的5年的時間里Zolbetuximab已在全球多中心開展Ⅲ期臨床試驗，國內(nèi)Claudin18.2的抗體藥物也在快速推進臨床，部分Claudin18.2藥物的信息如下。整體來說靶向Claudin18.2的藥物呈現(xiàn)百舸爭流，千帆競渡的壯觀場面，筆者認為在早期臨床試驗靈活的設(shè)計模式是快速推進靶向Claudin18.2的藥物臨床進展的關(guān)鍵因素，而臨床階段藥效學(xué)評估是發(fā)揮臨床試驗靈活的設(shè)計模式不可或缺的一部分。
表1：部分Claudin18.2藥物的研發(fā)進展
Claudin18.2抗體藥物IMAB362 (Zolbetuximab)藥效學(xué)分析方法分析解析
Zolbetuximab作為第一個進入臨床靶向Claudin18.2的抗體藥物，也是臨床階段推進最快的抗體藥物，對于其藥效學(xué)分析方法和數(shù)據(jù)，可以通過專利檢索和文獻得到，可作為靶向Claudin18.2候選在研藥物的參考。本文主要通過已授權(quán)的專利文件US10421817B1和文獻A phase I dose-escalation study of IMAB362 (Zolbetuximab) in patients with advanced gastric and gastro-oesophageal junction cancer記錄的相關(guān)分析方法和數(shù)據(jù)，解析下臨床階段和臨床前藥效學(xué)評估方法的特征。
Zolbetuximab發(fā)揮藥效學(xué)主要依賴的是其ADCC功能及CDC功能，關(guān)于ADCC功能從專利的描述臨床前方法（圖1）和文獻記載的臨床階段（圖2），方法條件參數(shù)的主要對比如表2
圖1：專利描述的臨床前藥效評估方法
圖2：文獻描述的臨床藥效評估方法
表2：臨床前和臨床分析方法主要條件參數(shù)對比
從條件參數(shù)對比來看，臨床前和臨床階段的藥效學(xué)評估方法可以說是兩個完全不同的方法。從筆者較為豐富的臨床藥效學(xué)評估經(jīng)驗來看，之所以有這樣的轉(zhuǎn)換是基于臨床檢測的復(fù)雜性需要更加穩(wěn)固和更加生理相關(guān)性的方法來達到臨床檢測的需求。如下圖3，筆者歸納的常用的幾種ADCC的檢測方法中，Zolbetuximab文獻記載的細胞殺傷的臨床檢測方法是更優(yōu)的選擇。
圖3：主要的ADCC檢測方法對比分析
熙寧生物自主開發(fā)的基于人免疫細胞的ADCC功能測定方法
熙寧生物基于Zolbetuximab披露的臨床檢測方法從NUGC4 CMV-luciferase穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建開始，自主開發(fā)了能夠適用于臨床階段PBMC樣品或者人血清Zolbetuximab樣品的檢測體系，適合靶向Claudin18.2的單抗，雙抗和ADC藥物的臨床階段樣品分析的細胞殺傷藥效學(xué)方法，有30倍以上更優(yōu)的信噪比，復(fù)孔信號CV較小，方法穩(wěn)固。
圖4：熙寧生物自主開發(fā)的基于人免疫細胞的ADCC細胞殺傷方法
基于熙寧生物對于Claudin18.2抗體ADCC功能和細胞殺傷功能的深入研究，熙寧生物構(gòu)建了基于人免疫細胞PBMC殺傷NUGC4 CMV-luciferase的檢測方法，基于人免疫細胞PBMC使用人血清中的Claudin18.2抗體殺傷NUGC4 CMV-luciferase的檢測方法； 基于人血清CDC功能殺傷CHO-K1 CMV-luciferase的方法等。可進行臨床前和Zolbetuximab的藥效學(xué)對比評估，臨床階段Claudin18.2相關(guān)藥物的藥效學(xué)評估，適用于CMC放行的Claudin18.2抗體 ADCC報告基因體系方法等，部分可出售的功能細胞系和檢測服務(wù)如下表：
表3：熙寧生物Claudin18.2靶點的可出售穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系和檢測服務(wù)內(nèi)容
總結(jié)討論
臨床的藥效學(xué)評估需要基于藥物作用的理解，case by case的去設(shè)計臨床階段的樣品分析方法，且該方法需要使用類似于臨床樣品的模擬樣品來進行較為嚴(yán)格的方法學(xué)驗證后才能用于臨床樣品的分析。通常情況下藥效學(xué)評估沒有明確的指導(dǎo)原則作為參考，以Fit to purpose為原則，驗證參數(shù)也需要基于對于方法的理解和樣品的基質(zhì)環(huán)境，采集環(huán)境的了解進行設(shè)定。由于人樣品基質(zhì)環(huán)境的復(fù)雜性，個體藥物作用的環(huán)境的差異性，不同采集時間樣品的穩(wěn)定性等因素的影響，藥物的臨床前的藥效學(xué)分析方法往往不適用于臨床樣品分析，強行轉(zhuǎn)換最大的可能性是得不到預(yù)期甚至前后矛盾的檢測結(jié)果。
每一個藥效學(xué)臨床階段的檢測方法均是個性化定制的方法，方法的適用性，方法的穩(wěn)健性，方法精密度等驗證參數(shù)均沒有固定的標(biāo)準(zhǔn)，需要CRO和藥企相關(guān)負責(zé)人進行充分的信息共通基礎(chǔ)上基于方法學(xué)開發(fā)的結(jié)果，方法學(xué)驗證的參數(shù)和預(yù)期樣品采集情況等去一步一步進行推進確定，緊密的溝通是開發(fā)一個合適的臨床階段藥效學(xué)分析方法基礎(chǔ)，高度專業(yè)化的技術(shù)能力是前提，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆椒▽W(xué)驗證過程是得到一個穩(wěn)健的臨床階段藥效學(xué)分析方法的關(guān)鍵。
